제주학 아카이브

첫째, 전복 (Haliotis discus Reeve)의 expressed sequence tag을 제작하여 전복에서 발현되는 새로운 유전자를 찾아내고 유전자의 특성과 기능을 분석한다. 둘째, 전복의 수정란에 외래 DNA 분자를 삽입할 수 있는 효과적인 electroporation 방법을 개발하여 형질전환 전복 연구에 기초가 되고자 한다. 전복은 다른 해양 무척추동물에 비해 유전정보, 유전자 이식 방법과 같은 분자 유전학 적인 연구가 턱없이 부족한 실정이다. 이런 어려운 연구 배경을 극복하기 위하여 이 연구에서는 전복의 cDNA로 제작한 ESTs database (1,170개의 cDNA clone)를 이용하여 새로운 유전자를 찾아 그 기능을 분석하고, 보다 효과적인 유전자 도입 방법을 개발하고자 하였다. 1차년도에는 juvenile abalone whole tissue의 mRNA에서 cDNA library를 제작하여, 무작위로 선발한 약 1170개의 EST clones에 대한 DNA 서열분석을 수행하였다. 분석된 서열을 기존의 dbEST와 비교하여 전복에서 발현되는 유전자를 밝히고 그들의 특성을 분석하였다. 2차년도에는 전복 수정란에 외래 DNA를 주입시키는 효과적인 방법을 개발하기 위해, 까막전복 actin gene의 proximal promoter와 enhancer를 포함하고 GFP를 reporter 유전자로 갖는 발현 벡터를 제작하였다. 이렇게 제작된 벡터를 전복의 수정난에 세포성 인자, 전기적인 변수, 물리화학적인 여러 변수들을 고려한 다양한 조건에서 electroporation하고 GFP의 발현 양상을 분석하여 최적의 조건을 찾아 형질전환 전복 의 연구에 응용하고자 하였다. 그리고 전복유래 항산화효소인 superoxide dismutase, catalase, glutathione-s-transferase와 arylsulfatase의 cDNA를 expression vector에 cloning하여 예상되는 단백질을 얻을 수 있었으며 각 효소의 특성을 분석하고 있다. 1. 까막전복 치패로부터 전 조직 (whole tissue) cDNA library를 제작하여, 총 1170개 clone의 염기서열 분석하였다. 2. 까막전복과 시볼트전복으로부터 beta-actin promoter를 클로닝하였고, 이 유전자를 외래 유전자 삽입을 위한 expression vector를 제작하였다. 제작된 vector의 활성은 EGFP reporter 유전자와 zebrafish를 이용하여 확인하였다. 3. Electroporation 조건 (voltage와 capacitance)을 달리하여 유전자 주입을 시도하였으며 각 조건에 따른 생존률을 확인하였다. 4. 전복유래 항산화효소를 cloning하였으며 각 효소의 특성은 recombinant protein을 생산하여 확인하고 있다.