제주학 아카이브

 ► 전복은 국내 양식 산업에 있어서 고부가가치를 지니는 매우 중요한 종으로써, 그 생산성 향상을 위해 먹이, 수온, 밀도, 광주기, 산란유도 등의 생리학적 연구들이 대부분 수행되어져 왔으나 체계화된 분자생물학적 연구는 미비한 실정이다. 현재 생명의학 연구 분야에서는, 유전자의 발현 pattern을 연구하기 위해 high throughput screening을 가능하게 하는 microarray기술이 도입되었으며, 그 이용범위가 지속적으로 확대되어가면서 다양한 생리현상을 규명하는데 이용되어지고 있다. 하지만, 주요 병원성 감염에 따른 해양 무척추 동물의 면역반응과 환경요인의 변화에 의한 스트레스 반응들을 연구하기 위한 microarray 기술 적용은 아직까지 매우 미비하다 ► 본 과제의 최종 목표는 GS-FLX titanium을 이용하여 까막전복의 유전체 정보를 대량으로 (1,500,000 reads) 밝혀 135K oligonucleotide microarray를 구축함으로써, 병원체, 환경오염물질, 해양환경에 기인한 스트레스에 반응하는 면역관련 유전자의 발현정보를 분석하고, 까막전복 (Haliotis discus discus)의 방어 메커니즘을 이해하고자 하였다. 연구결과 ► 면역자극원을 이용한 까막전복의 면역, 생리적, 화학적 스트레스에 반응 하는 유전자의 전사활성 유도 ► GS-FLX titanium을 이용한 cDNA의 염기서열 분석 - 1,593,772개의 reads 분석 - 34,700개의 unigene을 확보 ► 135K 전복 oligonucleotide chip 제작 - 34,771개의 transcript를 확보하였고 이를 이용하여 135K oligonucleotide chip (12x135K)을 제작 ► 135K oligonucleotide chip을 이용한 microarray 실험 및 분석 - 면역유도물질을 주입한 전복과 대조구로 0.9% saline이 주사된 전복으로부터 6시간 및 24시간째에 아가미 조직을 적출하고 RNA를 분리, 135K oligonucleotide chip을 이용한 발현변화 분석을 수행 ► 50개 이상의 full-length cDNA cloning - GS-FLX data를 기반, RACE등을 이용하여 총 51개의 면역관련 유전자의 full-length의 염기서열을 획득 ► 총 6개의 재조합 단백질 획득 및 bioactivity test를 이용한 기능분석 ► 총 15개의 면역관련 유전자의 Real-time PCR을 통한 유전자 발현양상 분석 연구결과의 활용계획 ► 바이러스, 박테리아, 기생충과 같은 면역반응을 활성화시키는 병원성 생물에 대한 면역반응 메카니즘 연구를 위한 다양한 신호전달 관련 유전자를 확보할 수 있음.